仙魚湯對小鼠Lewis肺癌作用

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表1各組Lewis肺癌小鼠的瘤體質量及抑瘤率比較（略）

Table1Comparisonoftumormassweightandtumorinhibitoryrateindifferentgroups

統(tǒng)計方法：單因素方差分析；①P＜0.05，②P＜0.01，與模型組比較

2.3各組細胞凋亡率及細胞周期分析仙魚湯高、中、低劑量組及CTX組小鼠lewis肺癌細胞凋亡率均高于模型組（P＜0.05或P＜0.01），各仙魚湯組隨著劑量的增大，凋亡率亦逐漸增加。仙魚湯高、中、低劑量組及CTX組處于G0/G1期細胞的比例均高于模型組，其中仙魚湯高劑量組、CTX組與模型組比較，差異有顯著性意義（P＜0.01）。仙魚湯高、中、低劑量組及CTX組處于S期細胞的比例均顯著性低于模型組（P＜0.05或P＜0.01），呈現(xiàn)明顯的G0/G1期阻滯現(xiàn)象。仙魚湯高、中、低劑量組及CTX組處于G2/M期細胞的比例與模型組比較，差異無顯著性意義（P＞0.05）。結果見表2、圖1。

2.4光鏡觀察模型組癌細胞大小和形態(tài)很不一致，可見瘤巨細胞；癌細胞核體積增大，細胞核和細胞漿比例增大，核的大小、形狀、染色不一，可見巨核、多核，核染色深，核染色質呈粗顆粒狀，分布不均勻；核仁肥大，數(shù)目增多，核分裂相增多，可見不對稱性、多極性及頓挫性等病理性核分裂相，間質內(nèi)淋巴細胞少見（圖2-a）。CTX組可見大片壞死，間質見較多的淋巴細胞等炎細胞浸潤，纖維組織反應性增生（圖2-b）。仙魚湯各劑量組可見癌巢內(nèi)壞死面積增大，間質可見淋巴細胞等炎細胞浸潤，可見較多的細胞凋亡小體（圖2-c、d、e）。

2.5各組bcl2染色強度指數(shù)凋亡相關基因bcl2的陽性產(chǎn)物主要位于細胞漿，可見大量的細胞漿棕黃色顆粒染色。仙魚湯各劑量組bcl2的染色強度指數(shù)均顯著低于模型組（P＜0.01），并呈劑量依賴性，而CTX組與模型組比較差異無顯著性意義（P＞0.05）。結果見表3、圖3。

表2各組小鼠Lewis肺癌組織的細胞凋亡率及細胞周期分析（略）

Table2Comparisonofcellapoptosisratioandcellcycleanalysisindifferentgroups

統(tǒng)計方法：單因素方差分析；①P＜0.05，②P＜0.01，與模型組比較

a.模型組b.CTX組c.仙魚湯低劑量組d.仙魚湯中劑量組e.仙魚湯高劑量組

圖1各組凋亡率檢測流式細胞圖譜比較（略）

Figure1Resultsofcellapoptosisratiodetectedbyflowcytometerindifferentgroups

a.模型組b.CTX組c.仙魚湯低劑量組d.仙魚湯中劑量組e.仙魚湯高劑量組

圖2各組腫瘤組織形態(tài)比較（HE染色，×400）（略）

Figure2Morphologicalchangesoftumorcellsunderlightmicroscopeindifferentgroups（HEstaining，×400）

a.模型組b.CTX組c.仙魚湯低劑量組d.仙魚湯中劑量組e.仙魚湯高劑量組

圖3各組bcl2陽性表達比較（免疫組化，×400）（略）

Figure3Positiveexpressionofbcl2indifferentgroupsdetectedbyimmunohistochemicalmethod

表3各組bcl2染色強度指數(shù)比較（略）

Table3Comparisonofstainingintensityindexofbcl2indifferentgroups

統(tǒng)計方法：單因素方差分析；①P＜0.01，與模型組比較

3討論

多數(shù)學者認為，肺癌發(fā)生發(fā)展的中醫(yī)病機可以用"痰、瘀、虛"3個字高度概括。其中正虛是肺癌發(fā)生的基礎，《醫(yī)宗必讀》云："積之成者，正氣不足，而后邪氣踞之。"正虛又以脾虛為主，"脾為生痰之源，肺為貯痰之器"。正是脾虛導致痰濁內(nèi)生，進一步血停成瘀，瘀血內(nèi)生，痰瘀內(nèi)阻，蘊積肺部，日久而發(fā)為本病。

廣州中醫(yī)藥大學陳銳深教授從肺癌病因病機出發(fā)，以健脾清肺、化痰祛瘀為治療大法，自擬了治療肺癌的經(jīng)驗方"仙魚湯"。方中君藥為黨參，具有補中益氣、健脾益肺、生津養(yǎng)血的功效，為補益肺脾氣之要藥。黃芪配合黨參，以補肺脾之氣；浙貝母清熱化痰、開郁散結；貓爪草散結消腫；三七片化瘀散結止痛，共為臣藥。仙鶴草收斂止血、解毒抗癌；魚腥草清熱解毒、消癰排膿；天冬養(yǎng)陰清肺生津；山海螺解毒消腫、排膿祛痰；山慈菇清熱解毒、化痰消腫散結；守宮散結止痛，共為佐藥。炙甘草調和諸藥，為使藥。綜合全方，扶正祛邪，攻補兼施，使祛邪而不傷正，共奏健脾清肺、化痰祛瘀之功效。

腫瘤的發(fā)生和發(fā)展不僅與腫瘤細胞的增殖、分化異常有關，而且與細胞凋亡的調控失常有關。人類細胞的凋亡機制十分復雜，目前已鑒定出了構成凋亡途徑的多種成分，揭示出凋亡是受多種基因調控的，例如p53、p16、cmyc、bcl2、bax等相關基因均參與了細胞凋亡的調控［7］。bcl2是一種凋亡相關基因，被激活的bcl2基因的主要作用是抑制細胞凋亡，下調bcl2基因的表達，對腫瘤細胞有顯著的生長抑制作用。bcl2可能通過阻斷凋亡的公共信號傳遞通路（如抑制線粒體釋放細胞色素C）達到抑制或阻斷多種細胞及細胞系的細胞凋亡過程。隨著該基因蛋白產(chǎn)物的過度表達，使得細胞增殖與凋亡的平衡發(fā)生紊亂，從而阻斷細胞凋亡的最后共同通道，從而抑制細胞凋亡，導致癌變［8－11］。

本研究通過動物移植性腫瘤實驗法探討仙魚湯對Lewis肺癌生長及腫瘤細胞凋亡的作用。結果表明，仙魚湯具有一定的抗腫瘤作用，而且其抑瘤作用隨著劑量的增加而增強。從HE染色的病理切片中發(fā)現(xiàn)，不同劑量仙魚湯組可見癌巢內(nèi)壞死面積增大，間質可見較多的淋巴細胞等炎細胞浸潤，可見較多的細胞凋亡小體。進一步采用流式細胞儀檢測凋亡率，結果表明仙魚湯具有促進小鼠Lewis肺癌細胞凋亡的作用，并且隨著劑量的增加作用也逐漸增強。仙魚湯各劑量組處于G0/G1期細胞的比例均高于模型組，處于S期細胞的比例均低于模型組，呈現(xiàn)明顯的G0/G1期阻滯現(xiàn)象，提示仙魚湯可能使G1期細胞不能通過細胞周期檢測點進入S期，從而發(fā)生G0/G1期阻滯，阻斷DNA復制，干擾腫瘤細胞周期正常進行，以起到抑制腫瘤的作用。免疫組化檢測結果顯示，仙魚湯各劑量組bcl2蛋白表達均顯著低于模型組，并隨著仙魚湯劑量的加大，腫瘤組織bcl2的染色強度指數(shù)也逐漸降低。本研究實驗結果提示仙魚湯可能通過降低bcl2表達的途徑促進腫瘤細胞凋亡，從而發(fā)揮抗腫瘤作用，對臨床用藥具有一定的指導意義。

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