復方夏枯草膠囊質量

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【摘要】建立復方夏枯草膠囊的質量標準。方法用薄層色譜法鑒定黃芩、鉤藤等；用HPLC法對夏枯草中熊果酸進行含量測定。結果薄層圖譜斑點清晰，陰性對照無干擾。夏枯草中熊果酸在0.473～3.5μg（r=0.9992）范圍內，對照品濃度與峰面積呈良好的線性關系，平均回收率為98.79％，RSD1.27％。結論該質量控制方法簡便可行，精密度高，重現性好，可用于復方夏枯草膠囊質量控制。

【關鍵詞】復方夏枯草膠囊質量標準TLCHPLC

【Abstract】ObjectiveToestablishthequalitystandardforFufangXiakucaoCapsule.MethodsQualitativeanalysisofBaicalin,UncariarhynchophyllaJackswereidentifiedbyTLCandthecontentsofUrsolicacidinPrunellavulgarisL.wasdeterminedbyHPLC．ResultsThespotsintheTLCwereclearandidentifiedwithouttheinterferenceofnegativecontrol.ThelinearrangeofUrsolicacidwas0.473～3.5μg（r=0.9992）．Theaveragerecoveryratewas98.79％wihRSD1.27％．ConclusionThemethodsaresimple，feasible，accurate,withgoodreproducibilityandcanbeusedforthequalitycontrolofFufangXiakucaoCapsule．

【Keywords】FufangXiakucaoCapsule;qualitystandard;TLC;HPLC

復方夏枯草膠囊是在臨床驗方基礎上研制的治療高血壓病的中藥復方制劑，由夏枯草、黃芩、鉤藤等藥味配伍而成，組方中夏枯草、黃芩均為重要組成，夏枯草中含有熊果酸成分，具有鎮靜、抗菌、抗炎等作用；黃芩主要功用為抗炎、降壓、鎮靜，主要有效成分以黃酮類化合物黃芩苷為主。因此，制訂復方夏枯草膠囊中黃芩等的定性標準及熊果酸的定量標準，對確保該產品的臨床療效有重要的意義。為有效控制本品質量，采用TLC鑒別黃芩、鉤藤；用HPLC法測定熊果酸的含量，保證測定的專屬性和結果的準確性。

1儀器與試藥

采用Waters高效液相色譜系統；CAMAG（瑞典）薄層色譜掃描儀；Waters2487雙波長紫外檢測器。

復方夏枯草膠囊為青島國風藥業股份有限公司提供，陰性對照樣品為自制。熊果酸標準品（批號：0742-9706）；黃芩苷標準品（批號120955-200406）；鉤藤對照藥材（121190-200402），均由中國藥品生物制品檢定所提供。硅膠G（青島海洋化工廠）；甲醇為色譜純，其他試劑均為分析純；水為重蒸餾水。

2方法與結果

2.1鉤藤的鑒別［3］取本品內容物2g，加入濃氨試液10ml使溶解，用三氯甲烷60ml加熱回流1h，濾過，濾液蒸干，殘渣加3%鹽酸溶液20ml使溶解，用濃氨試液調pH至堿性，再用乙醚提取3次，每次20ml，合并乙醚液，揮干，殘渣加甲醇1ml使溶解，作為供試品溶液。同法制除鉤藤外的陰性對照液。另取鉤藤對照藥材2g，同法制成對照藥材溶液。吸取上述三種溶液各5μl，分別點于同一硅膠G薄層板上，以氯仿-乙酸丁酯-氨水（18：3：0.2）為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈（365nm）下檢視。供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點，陰性對照無干擾。見圖1。

圖1鉤藤色譜圖

注：1,3.樣品2.鉤藤對照藥材4.陰性對照

2.2黃芩的鑒別取本品內容物2g，加無水乙醇回流提取1h，濾過，濾液蒸干，殘渣加1%硫酸溶液10ml使溶解，用乙酸乙酯提取3次，每次20ml，合并乙酸乙酯液，水浴蒸干，殘渣加甲醇2ml使溶解，作為供試品溶液。同法制備除黃芩外的陰性對照液。再取黃芩苷對照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作為對照品溶液。吸取上述三種溶液各3μl，分別點于同一硅膠G薄層板上，以甲苯-正丁醇-甲酸-水（15：3：1：2）為展開劑展開，取出，晾干，置紫外光燈（365nm）下檢視，再噴以2%三氯化鐵乙醇溶液顯色，日光下檢視。供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點，陰性對照液無相同斑點。見圖2。

圖2黃芩苷色譜圖

注：1，3.樣品液2.黃芩苷對照品4.陰性液

2.3熊果酸含量測定［2］

2.3.1色譜條件色譜柱：chromasilC18（規格4．6mm×200mm,5μm）；流動相：甲醇-水（85：15），檢測波長210nm，進樣量20μl。理論塔板數按熊果酸峰計算應不低于4000。樣品測定色譜圖見圖3。

圖3熊果酸含量測定的HPLC圖譜

注：A：樣品B：對照品C：陰性對照溶液

2.3.2對照品溶液的制備精密稱取熊果酸對照品，用甲醇將其定容至刻度，搖勻，制成濃度為20μg／ml對照品溶液。

2.3.3供試品溶液制備取膠囊內容物粉末約0.5g，精密稱定，置索氏提取器中，加乙醚適量，加熱回流4h，放冷，溶劑揮干，殘渣用石油醚（60～90℃）浸泡2次，每次15ml，每次2min，傾出石油醚液，殘渣揮干殘留溶劑，用甲醇溶解并轉移至50ml量瓶中，搖勻，濾過，即得。

2.3.4測定方法分別精密吸取對照品，供試品溶液各20μl，注入液相色譜儀，測定，即得。含熊果酸不得少于0.42％。本品每粒含夏枯草以熊果酸（C30H48O3）計，不得少于1.89mg。

2.3.5線性關系考察精密稱取熊果酸對照品適量，加甲醇稀釋成200μg／ml,精密吸取此對照品溶液1.0、1.5、2.0、2.5、3.0、4.0ml置10ml容量瓶中，用甲醇稀釋到刻度，搖勻，分別取20μl進樣測定，按上述色譜條件測定峰面積，回歸方程為：Y=235711X＋4863，r=0．9992，結果表明熊果酸在0．473～3.5μg范圍內線性關系良好。

2.3.6精密度試驗將對照品儲備液稀釋10倍后精密吸取20μl，連續進樣5次，測定峰面積，其RSD為1.23％。結果表明該色譜條件精密度良好。

2.3.7重復性試驗取同一批號樣品5份，按上述條件測定，結果樣品中熊果酸平均含量為0.754％，RSD值為1.75％。

2.3.8穩定性試驗將對照品儲備液稀釋10倍后精密吸取對照品溶液20μl，室溫下放置，每隔一定時間進樣一次，測定24h內峰面值，熊果酸含量的相對標準偏差為1.42％。結果表明室溫下供試品溶液較穩定。

2.3.9加樣回收率測定取已知熊果酸含量（0.754％）的供試品溶液6份，分別精密加入一定量的熊果酸對照品，按上述含量測定項下的方法測定，結果見表1。平均回收率為98.79％，RSD值為1.27％。表1加樣回收率試驗測定結果

2.3.10樣品測定分別取本品內容物粉末，精密稱定，然后按上述方法制備供試品溶液，分別精密吸取20μl，按上述色譜條件測定，計算熊果酸的含量。結果熊果酸平均含量為0.739％。見表2。表2含量測定結果

3討論

本品系多味中藥組成的復方制劑，其中夏枯草為方中君藥。為準確測定熊果酸的含量，參考藥典及相關文獻資料，曾進行了薄層掃描法與高效液相法比較，最終確定HPLC法的色譜條件及測定方法，并進行了方法學考察，結果表明熊果酸吸收峰靈敏度較高，分離較為理想，陰性對照液測定顯示在熊果酸出峰位置處無其他干擾，保證了檢測的準確性。文中鉤藤的薄層鑒別，經多次實驗此方法提取效果好，展開系統也曾嘗試用乙酸乙酯-丁酮-氨水等，但不能得到很好的分離，后經優化采用氯仿-乙酸丁酯-氨水，取得較滿意的層析效果。黃芩苷的薄層鑒別經實驗比較，以硅膠G板代替藥典的聚酰胺薄膜法，采用文中所述展開系統，結果斑點清晰，可以有效分離，且陰性無干擾。

【參考文獻】

1國家藥典委員會．中國藥典，一部．北京：化學工業出版社，2005，198．

2閆雪生，劉青松.高效液相色譜法測定中藥中熊果酸的含量.臨床與試驗研究，2005，3（5）：4-6.

3鄭琴，潘革.正天丸中鉤藤的薄層色譜鑒別方法改進.中國藥師，2003，6（4）：248-249.