新會陳皮總黃酮提取工藝

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摘要：目的優化新會陳皮總黃酮提取的工藝條件。方法在單因素試驗的基礎上，以總黃酮含量為指標，采用正交試驗方法考察液固比、乙醇濃度、提取時間等因素。結果各因素的影響次序是液固比＞提取溫度＞提取時間；最佳提取工藝為：乙醇體積分數為60%，液固比1∶25，提取溫度70℃，提取時間3h，提取1次。結論優選得到的工藝穩定可行。

關鍵詞：新會陳皮;總黃酮;正交設計

OptimizationofextractionprocessoftotalflavonoidsinXinhuidryorangepeelbyorthogonaldesign

LINLin,LINZi-xia,HUANGQing-hua

(SectionofAnalyticalChemistry,GuangdongPharmaceuticalUniversity,Guangzhou,Guangdong510006,China）

Abstract:ObjectiveTooptimizeextractionprocessconditionfortotalflavonoidsinXinhuidryorangepeel.MethodsOnthebasisofthesingleexperimentalfactor,theoptimizedextractionconditiononthebasisoftotalflavonoidsweredeterminedbyorthogonaldesign.ResultsTheorderoffactorswhichaffectedthetotalflavonoids’extractionwas:solventquantity＞extractiontemperature＞extractionduration;Theoptimumextractionconditionsareextractiononcewith60%ethanol,solventratio1∶25at70℃for3hoursinwaterbath.ConclusionThemethodissimple，convenient,andaccurate.

Keywords:XinHuidryorangepeel;totalflavonoids;orthogonaldesign

陳皮是蕓香科植物橘CitusreticulataBlanco及其栽培變種的干燥成熟果皮，藥材分為“陳皮”和“廣陳皮”。“廣陳皮”為茶枝柑Citusreticulata‘Chachi’的干燥成熟果皮，主產于廣東新會，是廣東十大道地藥材之一。據報道陳皮的有效成分為黃酮類化合物和揮發油，具有抗衰老、軟化心血管、減輕實驗動物的動脈粥樣硬化等功效［1-4］。影響陳皮總黃酮提取的因素很多，本文選擇乙醇體積分數，提取溫度，提取時間，液固比和提取次數進行單因素試驗，在此基礎上采用正交試驗，優選得到新會陳皮總黃酮提取的最佳工藝。

1材料與儀器

TU-1810紫外可見分光光度計(北京普析通用儀器有限責任公司)，旋轉蒸發器(上海亞榮生化儀器廠)，恒溫水浴鍋，索氏抽提器等。

樣品由新會陳皮協會提供，并由廣東藥學院中藥鑒定教研室李書淵教授鑒定為茶枝柑CitusReticulataChachi的干燥成熟果皮。樣品粉碎成粗粉，置干燥箱于60℃烘12h以上。于閉光、陰涼處存放。橙皮苷（購自中國藥品生物制品檢定所，批號110712-200512），其他試劑為分析純。

2方法與結果

2.1陳皮總黃酮的提取

稱取約5g陳皮粗粉置250mL燒瓶中，加入石油醚(30～60℃)80mL，60℃回流脫脂2h；揮干石油醚后，根據實驗要求，按照不同的水提取溫度、提取時間以不同液固比及提取次數進行提取，抽濾，洗滌濾渣，合并濾液和洗液，濃縮去適量的乙醇，然后轉入100mL量瓶中，定容，搖勻，即為供試品溶液。

2.2橙皮苷標準曲線的繪制

取0.2274mg/mL的橙皮苷對照品貯備液，精密吸取0.5、1、1.5、2.0和2.5mL置25mL量瓶中，加體積分數為60％的乙醇至刻度。在285nm處測定吸收度,并繪制標準曲線。結果表明：在4.548～22.74μg/mL范圍內有良好的線性關系，回歸方程為A=0.033C+0.013，r=0.9993。

2.3測定方法

取一定提取條件下所得的供試品溶液，適當稀釋，在285nm處測定樣品的吸光度。根據標準曲線計算總黃酮的含量。以陳皮總黃酮的得率(％)為指標，確定最佳提取條件。

2.4單因素試驗

選取水浴溫度、乙醇體積分數、提取時間、液固比、提取次數這5個可能影響提取效果的因素做單因素試驗，以確定相關因素對陳皮提取物中黃酮含量的影響，結果見圖1。

A.提取溫度;B.乙醇體積;C.提取時間;D.液固比;E.提取次數圖15種因素對陳皮總黃酮得率的影響（略）

Fig.1Effectoffivefactorsontheyieldoftotalflavonoids

由圖1可以得出：在70℃時陳皮總黃酮得率達到最大，故可以確定最佳的提取溫度為70℃;乙醇體積分數大于60％，陳皮總黃酮得率逐漸減少，故可以確定最佳的乙醇體積分數為60％;提取時間從2h后得率增長不大，以5h為最高;液固比在30倍后有顯著減少，以25倍為最高;提取1次后得率增長不大，從節省成本和節省溶劑的角度，提取次數為1次。

2.5正交試驗設計優選最佳提取條件

通過單因素實驗選取影響較大的三個因素：提取時間、提取溫度和液固比，運用正交設計實驗法，選用三因素三水平來確定陳皮總黃酮提取的最佳條件。實驗結果見表1～3。

表1實驗因素水平表（略）

Tab.1Factorsandlevels

從表2的直觀分析可以看出，3個因素對總黃酮提取含量的影響次序：液固比、提取溫度、提取時間。

從表3的方差分析可以看出，液固比和提取溫度對結果有顯著性影響，提取時間對結果的影響不顯著，從經濟、省時的原則考慮，提取時間定為3h。綜合上面的因素，最佳提取工藝：體積分數為60％的乙醇，提取溫度70℃，液固比1∶25，提取時間3h，提取1次。

表2L9(34)正交實驗結果與直觀分析（略）

Tab.2ResultofL9(34)orthogonalexperimentandanalysis

表3L9(34)正交實驗方差分析表（略）

Tab.3ANOVAanalysisofL9(34)orthogonalexperiment

2.6驗證實驗

按上述優化提取條件平行做3份樣品，結果穩定，證明該方案可行。

3討論

3.1測定陳皮中總黃酮時，文獻大多采用蘆丁為對照品和“NaNO2-AlNO3-NaOH”體系，使得吸收峰向高處移動，以減少干擾［5-6］。但實際上陳皮總黃酮基本不含蘆丁，絡合后蘆丁最大的吸收峰和陳皮總黃酮的吸收峰相差較大。本文用陳皮總黃酮的主要成分橙皮苷為標準品，直接測定。實驗結果顯示兩者的最大吸收波長很接近。該方法簡單，易操作，技術成熟，重現性好。

3.2陳皮總黃酮主要為黃酮苷類，用乙醇提取較水提好，得率高，雜質少，有利于后續的分離，溶劑可回收，適于工業生產。

【參考文獻】

［1］王姝梅，何春蘭.陳皮提取物清除氧自由基和抗脂質過氧化作用［J］.中國藥科大學學報，1998,29(6):462～465.

［2］蘇丹，秦德安.陳皮提取液抗氧化及延緩衰老作用研究［J］.華東師范大學學報:自然科學版,1999(1):100～102.

［3］李琴山，婁桂予，錢民章,等.橙皮苷與蘆丁體外抗高密度脂蛋白氧化修飾的作用［J］.中西醫結合學報,2004,3(2):115～120.

［4］趙國華，陳宗道.柑桔類黃酮生物活性的研究進展［J］.食品與發酵工業,2001，27(3):71～75.

［5］房方，張廣強，謝新年.用分光光度法進行黃酮類化合物含量測定的研究［J］.河南中醫藥學刊,1997,12(1):17～19.

［6］顏仁梁，劉志剛.中草藥、中藥制劑中總黃酮類化合物含量測定方法綜述［J］.廣州醫藥,2005,36(6):6～10.