高效液相色譜儀
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高效液相色譜儀范文第1篇
關(guān)鍵詞：安捷倫1260；高效液相色譜儀；日常維護(hù)；維護(hù)環(huán)節(jié)
中圖分類號：O657.7+2 文獻(xiàn)標(biāo)識碼：A
高效液相色譜儀（HPLC），它具有高分辨率、高靈敏度、速度高效、色譜柱可以多次反復(fù)利用、流出組很容易收集等優(yōu)良性能，是我國實(shí)驗(yàn)室中使用頻率很高的分析型儀器。現(xiàn)今已經(jīng)被大量使用到生物醫(yī)藥研究、大氣環(huán)境分析、農(nóng)業(yè)食品檢測、無機(jī)分析等諸多領(lǐng)域。
安捷倫1260大大提高了HPLC 的壓力上限。等度泵、四元泵和二元泵系統(tǒng)壓力上限可以高達(dá)600bar，其最高流速可以達(dá)到每分鐘5mL。而等度泵和四元泵系統(tǒng)達(dá)壓力上限200 bar時，流速可以實(shí)現(xiàn)10mL/min，另外再加之80 Hz的檢測速率和提高了10倍左右的高靈敏度，使安捷倫1260通用性達(dá)到了新的很高的水平，安捷倫1260并可實(shí)現(xiàn)更高的分離度和更快的分離速度。安捷倫1260是一種高精密的儀器，其對日常維護(hù)有很高的要求：
1 安捷倫1260高效液相色譜儀的運(yùn)行環(huán)境
為了儀器的正常合理運(yùn)轉(zhuǎn)及其保養(yǎng)，應(yīng)該將儀器放置在平穩(wěn)固定的臺面上，要求臺面無振動，周圍無輻射和磁場。“要保持干凈無灰塵，儀器工作的溫度大致范圍要求是在15～30℃，周邊空氣的相對濕度在30%～80%之間”[1]。另外，因?yàn)榱鲃酉啻蠖鄶?shù)是有機(jī)溶劑，我們還要保持室內(nèi)有一些排風(fēng)扇等通風(fēng)換氣的設(shè)施設(shè)備。
2 安捷倫1260高效液相色譜儀的開機(jī)維護(hù)
首先檢查檢測使用的流動相以及色譜柱是否準(zhǔn)確無誤，然后再打開儀器的穩(wěn)壓電源，而后再開輸液泵、柱箱。設(shè)置好色譜柱的最大保護(hù)柱壓，進(jìn)行排氣工作，并要確保流路時不會有氣泡。這是因?yàn)闅馀輹U(kuò)大基線的噪聲率，造成安捷倫1260高效液相色譜儀靈敏度不斷下降，如果有氣泡，氣泡里的氧氣還會氧化儀器組件，影響機(jī)器的性能指標(biāo)。而關(guān)于流速切不可操之過急，我們應(yīng)該從小到大一點(diǎn)點(diǎn)地加速，這樣是為了更好地保護(hù)色譜柱。與此同時，還要注意仔細(xì)觀察，觀察柱壓與流速能否保持相對應(yīng)的平穩(wěn)和合理增加，待到流速已經(jīng)達(dá)到所需要的流速并最終讓柱壓穩(wěn)定之后，然后再讓檢測器工作，這樣有利于延長檢測器的使用壽命。
3 安捷倫1260高效液相色譜儀柱前維護(hù)
由于臨床上的樣本多為較為復(fù)雜的混合物，而這些填料都是很細(xì)小的，并且色譜柱的內(nèi)腔容積非常小，這就會導(dǎo)致堵塞現(xiàn)象。同樣，溶液里的細(xì)小微粒也會加大進(jìn)樣閥、泵頭內(nèi)的藍(lán)寶石活塞桿和活塞的堵塞和磨損概率。安捷倫1260高效液相色譜儀用緩沖鹽的時候，緩沖鹽溶液會產(chǎn)生高壓析鹽情況，會產(chǎn)生一些小的鹽粒，這些鹽粒會附著在活塞桿上，并會隨著活塞桿運(yùn)動，這就很容易使儀器產(chǎn)生劃痕現(xiàn)象，磨損儀器中的密封墊，從而產(chǎn)生漏液等問題。
在使用中應(yīng)當(dāng)注意，過濾是非常重要的環(huán)節(jié)，有效過濾才能夠有效保護(hù)色譜柱、儀器。為了避免這種情況，不能使用已經(jīng)存放日期過長的蒸餾水及磷酸鹽溶液，如果條件許可的話，可以采用“在溶液中加入0.0001-0.001M的疊氮化鈉”[2]的方法來處理解決。也可以在溶劑瓶內(nèi)溶劑的上方不斷地吹入比較穩(wěn)定的氬氣從而實(shí)現(xiàn)隔絕空氣的目的。還要注意不要把溶劑瓶放在光線強(qiáng)烈的地方，這樣會導(dǎo)致溶液失效，為了緩解陽光的失效作用，盡量使用琥珀色的溶劑瓶放置。還可以在色譜柱前加上保護(hù)柱，從而避免色譜柱的污染，進(jìn)而延長柱子的使用壽命。同時要定期用水沖洗所有的通道，從而有效除去閥口上可能出現(xiàn)的鹽沉淀。
使用梯度比例閥時，當(dāng)鹽溶液與有機(jī)溶劑溶液混合時，鹽溶液能夠?qū)崿F(xiàn)與有機(jī)溶液有效重新融合并不會出現(xiàn)沉淀現(xiàn)象。假如在比例閥的混合點(diǎn)上，由于重力的因素使鹽顆粒慢慢沉淀下來，通常閥A接水相鹽溶液，D接有機(jī)溶劑，此連接法可有效使鹽回落到鹽溶液中并被溶解。但是，假若把這個連接法顛倒過來，這些鹽可能落在有機(jī)溶劑之中，從而容易出現(xiàn)問題。因此，當(dāng)使用緩沖鹽溶液和有機(jī)溶劑時，建議要將緩沖鹽的通道接在A通道上，而將有機(jī)溶液的通道直接接在D通道上。
4 安捷倫1260高效液相色譜儀關(guān)機(jī)維護(hù)
實(shí)驗(yàn)完成后，要把色譜柱沖洗干凈。首先要去完成的就是關(guān)掉檢測器，之所以要這樣做是為了節(jié)約光源，保證儀器燈的有效使用年限。另外，還要切斷色譜柱與檢測器的連接程序，之所以這樣是為了防止污染檢測池。用流動相沖洗流路30多min，然后再用15%的甲醇水洗10min左右，最后再用純甲醇沖30min左右，并用一些純化水同時沖外流路等地方。輸液泵的流速應(yīng)慢速減小到0時，才可關(guān)閉泵和穩(wěn)壓器。“反相系統(tǒng)用90%～95%有機(jī)相+10%～5%水相封存反相色譜柱”[3]，兩端封死。如長時間存放可將柱子完全浸泡在有機(jī)相內(nèi)，以防用純有機(jī)相封存反相色譜柱，如果長期保存有機(jī)相會揮發(fā)。
參考文獻(xiàn)
[1] 黃大煒.高效液相色譜儀在使用中的幾個問題[J].中國藥事，2010（3）：26.
[2] 豐昌云.高效液相色譜儀的故障對策[J].精細(xì)化工中間體，2011（7）：54-55.
高效液相色譜儀范文第2篇
【關(guān)鍵詞】高效液相色譜；孔雀石綠；隱形孔雀石綠；水產(chǎn)品
0.前言
孔雀石綠（MG）為三苯甲烷類工業(yè)染料, 在水產(chǎn)養(yǎng)殖上可以有效的預(yù)防與治療各類水產(chǎn)動物的水霉病、鰓霉病和小蟲病，并能保持水產(chǎn)品的新鮮度。一些水產(chǎn)品販運(yùn)商和酒店為保持水產(chǎn)品新鮮度普遍使用MG，使用MG后的魚即使死亡后顏色也較為鮮亮，消費(fèi)者很難從外表進(jìn)行辨認(rèn)。MG 在水生生物體中的主要代謝產(chǎn)物為隱色孔雀石綠（LMG），MG 具有毒性強(qiáng)、高殘留和致畸、致癌、致突變等副作用。LMG 由于不溶于水，其殘留毒性比MG 更強(qiáng)，保留時間更長。所以，目前世界上諸如美國、日本、加拿大和歐盟等許多國家已將MG 列為水產(chǎn)養(yǎng)殖禁用藥物，我國也于2002年將其列入食品動物禁用的獸藥及其化合物清單。2008年我國公布的食品中可能違法添加的非食用物質(zhì)名單中就有孔雀石綠。雖然MG 已被列為水產(chǎn)養(yǎng)殖禁用藥物，但因其價格低廉和保鮮，仍有一些水產(chǎn)養(yǎng)殖戶和酒店在普遍使用。
目前孔雀石綠的檢測方法主要有高效液相色譜-熒光檢測法[1][2]、高效液相色譜-紫外檢測法和液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法[3][4][5]。本文在國標(biāo)方法的基礎(chǔ)上進(jìn)行優(yōu)化，前處理方法與國標(biāo)法相同（此文略），就流動相的選擇、流動相溶劑比例和用氨基柱代替C18柱方面進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。計(jì)算出線性范圍、最低檢測濃度和精密度。
1.實(shí)驗(yàn)部分
1.1儀器及試劑
1.1.1儀器
（1）高效液相色譜儀。
（2）分析天平 感量0.1mg。
1.1.2試劑
（1）乙睛：色譜純。
（2）乙酸銨：色譜純。
（3）孔雀石綠（MG）純度98%。
（4）隱色孔雀石綠（LMG）純度98%。
（5）0.125mol/L乙酸銨溶液：稱取乙酸銨9.64g，用純水溶解并定容至1000mL，用 0.45μm濾膜過濾。
（6）MG標(biāo)準(zhǔn)儲備液：準(zhǔn)確稱取孔雀石綠0.1000g，用乙睛溶解并定容至100mL。該標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度為1mg/mL。避光、冰箱冷凍保存。
（7）MG標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)用液：吸取 1mg/mL MG標(biāo)準(zhǔn)儲備液用乙睛稀釋至1.0μg/mL。
（8）LMG標(biāo)準(zhǔn)儲備液（1mg/mL）：準(zhǔn)確稱取LMG 0.1000g，用乙睛溶解并定容至100mL 。
（9）LMG標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)用液：吸取1mg/mL LMG標(biāo)準(zhǔn)儲備液用乙睛稀釋至1.0μg/mL。
（10）MG和LMG標(biāo)準(zhǔn)混合溶液分別吸取MG和LMG標(biāo)準(zhǔn)儲備液，用乙睛稀釋成不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)混合溶液。
1.2儀器條件
檢測器：紫外-可見光檢測器，波長 618nm。
色譜柱：氰基柱，4.6mm×250mm，5μm。
流動相：乙睛-0.125mol/L 乙酸銨（pH4.5）=（47+53）。
柱 溫：35℃。
流 速：1mL/min。
進(jìn)樣量：20μL。
1.3 測定
吸取20μL MG和LMG標(biāo)準(zhǔn)混合溶液（5.0μg/mL）分別注入色譜儀，在上述色譜條件下，繪制色譜圖。見下圖。
5.0μg/mL 孔雀石綠和無色孔雀石綠標(biāo)準(zhǔn)混合溶液色譜圖
2.結(jié)果與討論
2.1流動相的選擇
MG和LMG的HPLC法分離，無論是C18柱還是氰基柱，多采用乙睛和乙酸銨作流動相的反相體系。其中乙酸銨濃度對MG和LMG的分離有很大影響。對于梯度洗脫方式多采用 50mmol/L乙酸銨溶液，而等梯度洗脫方式乙酸銨溶液濃度較大,為0.125mol/L。
2.2 流動相溶劑比例的影響
在上述色譜條件下，用1.0μg/mL MG和LMG標(biāo)準(zhǔn)混合溶液在不同比例（V/V）的乙睛—0.125mol/L 乙酸銨溶液中觀察分離效果，結(jié)果表明，在乙睛—乙酸銨溶液（pH4.5）=47+53 時分離效果好，靈敏度最高，所以選擇該溶劑比為流動相比例。見表 1。
表1 流動相溶劑比例對 LMG/MG 分離的影響
2.3 最低檢測濃度
在上述色譜條件下，以3S/N的響應(yīng)信號為最低檢測濃度，LMG的最低檢測濃度為0.02μg/mL，MG的最低檢測濃度為0.05μg/mL，均能滿足試驗(yàn)要求。以取樣量10.0g 計(jì)，最低檢測濃度 LMG為2μg/kg，MG為5μg/kg。
2.4 線性范圍試驗(yàn)
上述色譜條件下，LMG和MG線性關(guān)系均良好。LMG和MG線性范圍為2μg/mL～160.0μg/mL，相關(guān)系數(shù)r>0.999。
2.5 精密度試驗(yàn)
在上述色譜條件下，分別用1.0μg/mL、5.0μg/mL和10.0μg/mL LMG/MG混合標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行平行性測定。保留時間相對標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）一般小于0.4%，峰面積相對標(biāo)準(zhǔn)偏差小于5%。見表2。
表2 不同濃度 LMG/MG 混合標(biāo)準(zhǔn)溶液測定精密度試驗(yàn)
3.結(jié)論
高效液相色譜法測定水產(chǎn)品中孔雀石綠的方法中，SC/T3021-2004 采用C18柱，等梯度洗脫方式，但需要較大流速（2ml/min）；而GB/T19857-2005法采用C18柱，梯度洗脫方式并需柱后衍生，比較繁瑣；GB/T20361-2006法中需要熒光檢測器，對只有紫外檢測器的用戶還需再購置；文獻(xiàn)有采用氰基柱分離的梯度洗脫方式。我們在研究這些方法的基礎(chǔ)上，采用氰基柱分離、改變流動相比例、減少流速（1.0mL/min）和等梯度洗脫方式，測出最低檢測濃度MG為0.05μg/mL，LMG為0.02μg/mL。線性范圍0.1μg/mL～160.0μg/mL。該方法具有保留時間短、分離效果好、線性范圍寬，節(jié)省試劑，減少成本等優(yōu)點(diǎn)，適用于水產(chǎn)品中MG和LMG含量檢測。
【參考文獻(xiàn)】
［1］GB/T20361-2006.水產(chǎn)品中孔雀石綠和結(jié)晶紫殘留量的測定，高效液相色譜熒光檢測法[S].
［2］楊賢慶，孫滿義，李來好等.水產(chǎn)品中孔雀石綠高效液相熒光檢測法的改良研究[J].食品科學(xué)，2008，29（8）：26-29.
［3］GB/T 19857-2005.水產(chǎn)品中孔雀石綠和結(jié)晶紫殘留量的測定[S].
高效液相色譜儀范文第3篇
【關(guān)鍵詞】 仔花感冒膠囊；對乙酰氨基酚；高效液相色譜法
Abstract：Objective To establish a method for the determination of Paracetamol in Zihua Ganmao Capsule. Method Samples were separated on a Kromasil-C18 column with the mobile phase of methanol- water (35∶65)， and the detection wavelength was set at 249 nm. Result The calibration curves were linear in the range of 0.165～0.99 μg (r＝0.999 9) for Paracetamol. The average recovery was 98.41% and RSD＝ 0.64% (n＝6). Conclusion The method is accurate and repeatable， and can be used for the quality control of Zihua Ganmao Capsule.
Key words：Zihua Ganmao Capsule；Paracetamol；HPLC
仔花感冒膠囊由狗仔花、柴胡、藁本、防風(fēng)、黃芩以及馬來酸氯苯那敏、對乙酰氨基酚等制成，具有清熱解毒、祛風(fēng)止痛的功效，用于風(fēng)熱感冒所見發(fā)燒頭痛、肢體不適。對乙酰氨基酚為其中的主要西藥成分之一，原質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中用紫外分光光度法[1]測定對乙酰氨基酚的含量，重現(xiàn)性差、陰性干擾嚴(yán)重、誤差較大。為了更好地控制該藥的質(zhì)量，筆者采用高效液相色譜法測定對乙酰氨基酚的含量，方法簡便、結(jié)果準(zhǔn)確、重復(fù)性好，可以較好地控制該產(chǎn)品的質(zhì)量。
1 儀器與試藥
高效液相色譜儀：日本島津LC-10AD泵，SPD-10AV紫外檢測器，C-R7Ae數(shù)據(jù)處理機(jī)；超聲波清洗器[必能信超聲(上海)有限公司]。對乙酰氨基酚(中國藥品生物制品檢定所提供，批號10018-200408，供含量測定用)；仔花感冒膠囊(廣西玉林制藥有限責(zé)任公司提供，批號635002、635003、635004、735001、735002)。甲醇為色譜純，其他為分析純、水為去離子水。
2 方法與結(jié)果
2.1 色譜條件
色譜柱：Kromasil-C18(4.6 mm×250 mm，5 μm)；流動相：甲醇-水(35∶65)，流速：0.5 mL/min，柱溫：30 ℃，檢測波長：249 nm，進(jìn)樣量10 μL。
2.2 對照品溶液的制備
精密稱取在105 ℃干燥至恒重的對乙酰氨基酚適量，加甲醇制成每1 mL含50 μg的溶液，即得。
2.3 供試品溶液的制備
取本品20粒的內(nèi)容物，精密稱定，研細(xì)，混勻，取約0.3 g，精密稱定。加甲醇35 mL，超聲處理(功率500 w，頻率50 kHz) 20 min，放冷，濾過，濾液置50 mL量瓶中，用少量甲醇分次洗滌容器和殘?jiān)匆簽V入同一量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，搖勻。精密量取1 mL置50 mL量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，即得供試品溶液。
2.4 線性關(guān)系考察
精密稱取在105 ℃干燥至恒重的對乙酰氨基酚適量，加甲醇制成每1 mL含0.165 mg的溶液作為對照品溶液。精密吸取對照品溶液1、2、3、4、5、6 mL，分別置10 mL量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，各精密吸取10 μL，分別注入液相色譜儀，依本法測定。以測得峰面積為縱坐標(biāo)，對照品進(jìn)樣量(μg)為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，求得線性回歸方程：Y＝3 450 864X－9 698，r＝0.999 9(n＝6)，表明對乙酰氨基酚進(jìn)樣量在0.165～0.99 μg范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系。
2.5 精密度試驗(yàn)
取同一份供試品溶液，依本法，按上述色譜條件測定，精密吸取10 μL，注入液相色譜儀，重復(fù)進(jìn)樣6次，對乙酰氨基酚峰面積的RSD＝0.55%，結(jié)果表明儀器精密度良好。
2.6 穩(wěn)定性試驗(yàn)
吸取供試品溶液10 μL，于0、1、4、8、12、24 h，分別注入液相色譜儀，按上述色譜條件測定，結(jié)果對乙酰氨基酚峰面積RSD＝1.6%，說明供試品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定。
2.7 重復(fù)性試驗(yàn)
取同一批號(批號635003)的仔花感冒膠囊樣品5份，按供試品溶液制備項(xiàng)下操作，制備5份供試品溶液，按上述色譜條件測定，分別吸取10 μL注入液相色譜儀，測得對乙酰氨基酚的平均含量為0.306 8 g/g(n＝5，RSD＝1.50%)。
2.8 加樣回收率試驗(yàn)
精密稱取已知含量的仔花感冒膠囊(對乙酰氨基酚含量為0.321 5 g/g)6份，分別準(zhǔn)確加入對乙酰氨基酚對照品溶液(98.5 mg/mL)各1 mL，按供試品溶液制備項(xiàng)下操作，制備6份供試品溶液，按上述色譜條件測定，分別吸取10 μL注入液相色譜儀。結(jié)果見表1。表1 加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果（略）
2.9 樣品測定
精密吸取對照品溶液和供試品溶液各10 μL，注入液相色譜儀，測定，記錄峰面積，根據(jù)對照品峰面積，計(jì)算出樣品溶液中對乙酰氨基酚的含量(見表2)。表2 樣品測定結(jié)果(略)
2.10 專屬性考察
對乙酰氨基酚對照品和仔花感冒膠囊在相同保留時間處有吸收峰，而陰性樣品在此處無吸收峰。色譜圖見圖1。
3 討論
由于仔花感冒膠囊樣品中對乙酰氨基酚含量較大，為了盡量減少誤差，提高方法的準(zhǔn)確性，通過紫外掃描，對乙酰氨基酚在249 nm有處最大吸收，故選擇249 nm為檢測波長。
根據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道，曾用過流動相、檢測波長：①甲醇-水(15∶85)，冰醋酸調(diào)pH至4.5，波長243 nm[2]；②以甲醇-0.025 mol KH2PO4(15∶85)用磷酸調(diào)節(jié)至pH 3.0，檢測波長為295 nm[3]，結(jié)果以本試驗(yàn)所用的流動相較佳，對乙酰氨基酚保留時間約為7.6 min，整個分析時間10 min。
在提取條件的選定過程中，我們曾采用過索氏提取法、熱回流法、超聲提取法，結(jié)果三者之間提取出的對乙酰氨基酚含量沒有顯著差異，但由于索氏提取法和熱回流法費(fèi)時間較長，不利于生產(chǎn)過程的控制，超聲20 min提取所測定的對乙酰氨基酚含量最高。因此，選擇了比較簡便、且效率較高的超聲提取法。
【參考文獻(xiàn)】
[1] 廣西壯族自治區(qū)衛(wèi)生廳.廣西藥品標(biāo)準(zhǔn)[S].1988.217.
[2] 容穎慈，李瑞明，盧秉忠，等.HPLC測定感冒靈顆粒中對乙酰氨基酚含量[J].廣東藥學(xué)，2003，13(2)：23－24.
高效液相色譜儀范文第4篇
【摘要】 目的建立益氣養(yǎng)陰降糖丸中葛根素的含量測定方法。方法采用高效液相色譜法（HPLC）法，檢測波長：250 nm， 流動相：甲醇0.1%枸櫞酸溶液(25∶75)， 流速：1.0 ml/min 。結(jié)果葛根素濃度在10.0～90.0 μg/ml范圍內(nèi)線性關(guān)系良好（r=0.999 6），加樣回收率為99.5%（n=3），RSD為1.2%。結(jié)論 此方法操作簡便，結(jié)果準(zhǔn)確，可用于益氣養(yǎng)陰降糖丸中葛根素的含量測定。
【關(guān)鍵詞】 高效液相色譜法； 葛根素； 益氣養(yǎng)陰降糖丸
Determination of Puerarin Content in Jiangtang Pill for Invigorating Qi Nourishing Yin by HPLC Method
Abstract：ObjectiveTo develop a method to determine the content of puerarin in Jiangtang pill for invigorating Qi， nourishing Yin.MethodsHigh Performance Liquid Chromatography (HPLC)， with detection wavelength of 250 nm， the mobile phase consists of methanol and 0.1% citric acid (25∶75)， at flow rate∶1.0 ml/min.ResultsThe linear range of puerarin was 10.0～90.0 μg/ml(r=0.999 6). The recovery of sample was 99.5%(n=3) with RSD of 1.2%.ConclusionThis method is simple accurate， and can be used for the determination of puerarin content in Jiangtang pill for invigorating Qi， nourishing Yin.
Key words：HPLC method; Puerarin; Jiangtang pill for invigorating Qi
益氣養(yǎng)陰降糖丸是我院研制的治療糖尿病的中成藥，由黃芪、葛根、桑寄生、生地、生水蛭等十多味中藥組成，具有益氣養(yǎng)陰、健脾運(yùn)津、除煩止渴、補(bǔ)益肝腎的作用，臨床療效良好。為了更有效地控制制劑的質(zhì)量，我們對其主要成分葛根素進(jìn)行了含量測定，以期為該制劑的質(zhì)量控制提供檢測方法。
1 儀器與試藥
日本島津LC10ATVP高效液相色譜儀，SPD10AVP紫外檢測器，賽多利斯BP211D電子天平，葛根素對照品（中國藥品生物制品檢定所01250107），甲醇為色譜純，益氣養(yǎng)陰降糖丸（自制）。
2 方法與結(jié)果
2.1 色譜條件
色譜柱為日本島津Shimpeck VPODS 柱（250 mm×4.6 mm，5 μm），流動相為甲醇0.1%枸櫞酸溶液(25∶75)， 流速1.0 ml/min，檢測波長為250 nm，柱溫為室溫。
2.2 溶液的制備
2.2.1 對照品溶液的制備
精密稱取葛根素對照品25 mg（60℃五氧化二磷減壓干燥4 h）置50 ml量瓶中，加流動相溶解，并稀釋至刻度，搖勻即得。
2.2.2 供試品溶液的制備
精密稱取供試品4.0 g，研細(xì)，置50 ml量瓶中，用甲醇溶解，超聲處理30 min，并稀釋至刻度，離心，取上清液，用0.45 μm的微孔濾膜濾過，精密量取續(xù)濾液5 ml，置25 ml量瓶中，用流動相稀釋至刻度，搖勻即得。
2.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備精密量取對照品溶液1.00，3.00，5.00，7.00，9.00 ml分別置于50 ml量瓶中，用流動相稀釋至刻度，制得標(biāo)準(zhǔn)溶液系列，取10 μl注入液相色譜儀，測定峰面積，以對照品溶液濃度C為橫坐標(biāo)，峰面積A為縱坐標(biāo)，進(jìn)行線性回歸分析，回歸方程為：A=50 939 138C-10 496，r=0.999 6，線性范圍10.0～90.0 μg/ml，最低檢測限為100 μg/ml（S/N≥3）。
2.4 精密度實(shí)驗(yàn)
在上述色譜條件下，取50μg/ml的對照品溶液，重復(fù)進(jìn)樣6次，峰面積的RSD值為0.62%。結(jié)果表明儀器的精密度較好。
2.5 重復(fù)性實(shí)驗(yàn)
精密稱取同一批號的樣品5份，按照樣品測定方法操作，測定含量，計(jì)算RSD為1.6%。
2.6 回收率實(shí)驗(yàn)
精密稱取已知葛根素含量的樣品3份，每份中分別加入精密稱定的葛根素對照品，混勻，照供試品的測定方法，計(jì)算平均回收率為99.5%（n=3），RSD為1.2%。
2.7 樣品的含量測定
取3個批號的樣品，制成供試品溶液，分別精密量取對照品溶液與供試品溶液各10 μl注入液相色譜儀，依法測定，以外標(biāo)法計(jì)算含量。結(jié)果見表1。表1 益氣養(yǎng)陰降糖丸中葛根素的含量（略）
3 討論
3.1 流動相的選擇
本實(shí)驗(yàn)比較了甲醇-水，乙醇-水，甲醇-酸液系統(tǒng)對樣品中葛根素保留時間、分離度的影響，結(jié)果發(fā)現(xiàn)采用甲醇-0.1%枸椽酸溶液（25∶75）的流動相色譜效果良好。
3.2 提取方法的比較
對于葛根素的提取，以往的文獻(xiàn)有采用索氏提取器提取的［1］，有采用水浴加熱回流提取的［2］，本實(shí)驗(yàn)采用甲醇為溶媒，采取超聲振搖提取法提取，效果良好，方便快捷。
方法學(xué)驗(yàn)證顯示，本實(shí)驗(yàn)所建立的方法簡便、可靠，可作為該制劑質(zhì)量控制的方法。
【參考文獻(xiàn)】
高效液相色譜儀范文第5篇
目的建立了參杞益腦膠囊中β-細(xì)辛醚的高效液相色譜含量測定方法。方法色譜柱為Thermo BDS Hypersil C18 (250 mm×4.6 mm，5 μm)；流動相為甲醇-0.1％冰醋酸溶液（60∶40）；柱溫35 ℃；流速1.0 ml·min-1；檢測波長為257 nm。結(jié)果β-細(xì)辛醚濃度在4.885 ～ 146.55 μg/ml之間峰面積與濃度具有良好的線性關(guān)系。其高、中、低3種濃度的平均回收率分別為103.2％，102.1％和100.2％；RSD分別為0.4％，0.3％和0.7％。結(jié)論方法簡便靈敏，結(jié)果準(zhǔn)確可靠，專屬性強(qiáng)，可用于參杞益腦膠囊中石菖蒲的質(zhì)量控制。
【關(guān)鍵詞】 參杞益腦膠囊 β-細(xì)辛醚 石菖蒲 高效液相色譜法
Abstract：ObjectiveTo establish a high performance liquid chromatographic method for the determination of β-asarone in Shenqiyinao Capsules. MethodsThe column was Thermo BDS Hypersil C18 (250 mm×4.6 mm，5 μm). The mobile phase was methanol - 0.1% glacial acetic acid solution (60∶40) and the temperature of column was 35 ℃. The flow rate was 1.0 ml·min-1 and the detection wavelength was 257 nm with external method. ResultsThe linear range of β-asarone was 4.885 ～ 146.55 μg·ml-1. The average recoveries of β-asarone were 103.2%， 102.1% and 100.2% with corresponding RSD of 0.4%， 0.3% and 0.7%，respectivery. ConclusionThe method is simple， sensitive， accurate and can be used for the determination of Rhizoma Acori Tatarinowii (RAT) in Shenqiyinao Capsules.
Key words：Shenqiyinao Capsules； β-asarone； Rhizoma Acori Tatarinowii (RAT)； HPLC
參杞益腦膠囊具有補(bǔ)益肝腎，益氣養(yǎng)血，健腦益智等功能，適用于肝腎不足，腦神失養(yǎng)所致的健忘，失眠，多夢，記憶力減退等癥。其處方來源于國家藥品監(jiān)督管理局標(biāo)準(zhǔn)，由枸杞子、黃精、白首烏、石菖蒲、豬腦粉、荷梗、肉蓯蓉、郁金、遠(yuǎn)志(蜜)、骨碎補(bǔ)、紫蘇子(炒)、人參、鹿茸等13味中藥組成。現(xiàn)行質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中未收載含量測定項(xiàng)目，目前僅有報(bào)道測定參杞益腦膠囊中毛蕊花糖苷的含量作為肉蓯蓉的質(zhì)量控制［1］。石菖蒲具有化濕開胃，開竅豁痰，醒神益腦的功能［2］，為其主藥之一。而β-細(xì)辛醚為石菖蒲的主要活性成分之一［3］，其在市售的石菖蒲揮發(fā)油中的含量占83.75％［4］。本實(shí)驗(yàn)采用高效液相色譜法測定參杞益腦膠囊中β細(xì)辛醚的含量，為參杞益腦膠囊中石菖蒲的含量提供了質(zhì)量控制方法。
1 儀器與試藥
Agilent 1100 高效液相色譜儀，配置G1311A 四元泵；G1313A 自動進(jìn)樣器；G1316A 柱溫箱；G1315B 二極管陣列(DAD)檢測器；Agilent 化學(xué)工作站；Elmasonic S 300H 型超聲波清洗器（功率1 500 W）。
甲醇為色譜純，水為超純水，其它試劑均為分析純。β-細(xì)辛醚對照品（廣州中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院實(shí)驗(yàn)中心，按面積歸一化法測定，含量為98.94％）。參杞益腦膠囊（批號：20060701，20060702，20060703，20060704，20060705，20060801，20060802，20060803，20060804，20060805 深圳萬基藥業(yè)有限公司生產(chǎn)并提供）；不含石菖蒲的陰性樣品（深圳萬基藥業(yè)有限公司生產(chǎn)并提供）。
2 方法與結(jié)果
2.1 色譜條件 色譜柱： Thermo BDS Hypersil C18 (250 mm×4.6 mm，5 μm)；流動相：甲醇-0.1％冰醋酸溶液（60∶40）；柱溫：35 ℃；流速1.0 ml·min-1；檢測波長為257 nm，進(jìn)樣體積20 μl。在上述色譜條件下β-細(xì)辛醚與其它組分能達(dá)到基線分離，色譜峰的理論板數(shù)為3139，并且石菖蒲陰性樣品無干擾，色譜圖見圖1～3。
2.2 對照品溶液的制備 精密稱取β-細(xì)辛醚對照品適量，加甲醇制成每毫升含 β-細(xì)辛醚35μg的溶液，搖勻，即得。
2.3 供試品溶液的制備 取本品20粒，求得平均裝量，將內(nèi)容物混合均勻，取本品內(nèi)容物約0.5 g，精密稱定，置50 ml量瓶中，加甲醇約30 ml，超聲處理30 min，放冷，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。
圖1 供試品溶液色譜圖（N=3 139，R＝2.42）（略）
圖2 β-細(xì)辛醚對照品溶液色譜圖（略）
圖3 石菖蒲陰性樣品溶液色譜圖（略）
2.4 線性關(guān)系考察 精密稱取β-細(xì)辛醚對照品19.54 mg，置20 ml量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻。精密量取3，3，2，2，2，1 ml分別置20，25，20，50，100，200 ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，分別取20 μl按“2.1”項(xiàng)下色譜條件注入液相色譜儀，以峰面積Y為縱坐標(biāo)，對照品濃度X (μg/ml)為橫坐標(biāo)，進(jìn)行線性回歸。回歸方程為：
Y=46.242 4X-42.458 8，r＝0.999 9
表明β-細(xì)辛醚在4.885～146.55 μg·ml-1濃度范圍內(nèi)具有良好的線性關(guān)系。
2.5 重復(fù)性實(shí)驗(yàn) 取同一批參杞益腦膠囊樣品，按“2.3”項(xiàng)下供試品溶液的制備方法制備6份供試品溶液，按上述色譜條件測定，結(jié)果RSD為2.2％，結(jié)果表明本法重復(fù)性良好。
2.6 精密度實(shí)驗(yàn) 精密吸取上述供試品溶液20 μl，連續(xù)進(jìn)樣6次，按上述色譜條件測定β-細(xì)辛醚峰面積，RSD為0.5％。
2.7 穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn) 取1份供試品溶液，分別于0，2，4，6，8，10 h進(jìn)樣20 μl，按上述色譜條件測定β-細(xì)辛醚的含量，RSD為0.6%，結(jié)果表明供試品溶液在10 h內(nèi)穩(wěn)定。
2.8 回收率實(shí)驗(yàn) 精密稱取已測定含量的樣品(批號20060805；含β-細(xì)辛醚1.57 mg/粒) 9份 (每種濃度3份，低濃度約0.15 g，中濃度約0.25 g，高濃度約0.70 g)，置50 ml量瓶中，分別精密加入β-細(xì)辛醚對照品溶液（0.249 6 mg·ml-1）3，5，15 ml，每種加入量平行操作3份，按“2.3”項(xiàng)下供試品溶液的制備方法，自“加甲醇約30 ml……”操作，各進(jìn)樣20 μl，記錄色譜圖，計(jì)算回收率。其高、中、低3種濃度的平均回收率分別為103.2％，102.1％和100.2％；RSD分別為0.4％，0.3％和0.7％。結(jié)果見表1。
2.9 樣品含量測定 取不同批號的樣品，分別按“2.3”項(xiàng)下供試品溶液的制備方法制備，測定含量。結(jié)果見表2。
表1 回收率實(shí)驗(yàn)結(jié)果（略）
表2 樣品中β-細(xì)辛醚的含量測定（略）
*為每粒中含量
3 討論
3.1 檢測波長的選擇 采用二極管陣列檢測器，在200～400 nm波長范圍內(nèi)檢測 β-細(xì)辛醚在流動相中的紫外吸收圖譜及參考相關(guān)文獻(xiàn)［5］，選擇257 nm為檢測波長。
3.2 流動相的選擇 考察了不同比例的甲醇-水、乙腈-水及甲醇-0.1％冰醋酸溶液等作為流動相體系，以甲醇-0.1％冰醋酸溶液(60∶40)為流動相時效果最好，供試品溶液中β-細(xì)辛醚能與其它組分獲得基線分離，且主峰符合要求。
3.3 耐用性實(shí)驗(yàn) 考察不同廠牌的HPLC儀：Agilent 1100 高效液相色譜儀、島津LC-2010A高效液相色譜儀；不同廠牌的色譜柱：Thermo BDS Hypersil C18柱，Luna C18柱和LiChrospherR100 RP-18e C18柱，由不同的實(shí)驗(yàn)者進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，也可得到滿意的色譜圖，表明本法的耐用性好。
致謝：廣州中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院實(shí)驗(yàn)中心的柯雪紅老師為本實(shí)驗(yàn)研究提供了β-細(xì)辛醚對照品，在此表示感謝！
【參考文獻(xiàn)】
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