晉升發(fā)言稿
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晉升發(fā)言稿范文第1篇
尊敬的各位農(nóng)商銀行領(lǐng)導(dǎo)、學(xué)校領(lǐng)導(dǎo):
大家好,非常榮幸能夠站在這里作為“百福慈善助學(xué)金”受助學(xué)生代表發(fā)言.
首先,我們要感謝“百福慈善助學(xué)金”對(duì)我們的支持與幫助.是它,在我們最困難的時(shí)候,伸出了援助之手,給我們以溫暖；是它,在我們最迷惘的時(shí)候,點(diǎn)亮了一盞燈,給我們以指引；是它,在我們最絕望的時(shí)候,默默支持著我們,給我們以希望.因此,我們要向“百福慈善助學(xué)金”以及所有幫助我們的愛(ài)心人士和組織,表達(dá)我們最誠(chéng)摯的謝意.
我是會(huì)昌中學(xué)高三18班的歐素嬌,在初三的那年,我的爸爸因?yàn)檐?chē)禍而意外離世,留下了我們姐弟5人,那個(gè)時(shí)候我的弟弟們還在上小學(xué)和幼兒園,姐姐還在讀職校,也是在那一年,陪伴了我那么久的媽媽改嫁了,本來(lái)是為了可以找到一個(gè)人代替我們的爸爸來(lái)照顧我們,讓我們可以順利地完成學(xué)業(yè),但是他卻只是帶走了媽媽……后來(lái),我來(lái)到了會(huì)昌中學(xué)就讀,但那個(gè)時(shí)候家里實(shí)在湊不出我們五姐弟的學(xué)費(fèi),高一軍訓(xùn)的第二天,我就對(duì)老師說(shuō)我要退學(xué),因?yàn)槟莻€(gè)時(shí)候真是堅(jiān)持不下去了,但是,在百福慈善基金的持續(xù)幫助下我終于走過(guò)來(lái)了,再也沒(méi)有退學(xué)的想法.
在百福慈善基金的幫助下,希望在座的每一個(gè)受助額同學(xué)都能夠明白,沒(méi)有人生來(lái)就應(yīng)該幫助我們,并不是因?yàn)槲覀兪侨跽?就應(yīng)該得到他人的幫助.百福慈善基金對(duì)我們的幫助,是出于愛(ài)心而非義務(wù).我們要以一顆感恩的心,正確看待它給予我們的幫助.我也希望在百福慈善基金的幫助下,我們能夠更加強(qiáng)大,成為一個(gè)生活中的強(qiáng)者.我們也要勿忘百福慈善基金的初心,做一個(gè)善良的人,在別人需要幫助的時(shí)候,永遠(yuǎn)不要吝惜自己的幫助,將曾經(jīng)自己所得到的愛(ài)心,所感受到的溫暖,傳遞下去.做一個(gè)正直善良的人,即使一貧如洗,也甘之如飴.在人生的道路上,免不了要經(jīng)受挫折與磨難,但我們要相信,命運(yùn)所有的安排都是最好的,正是因?yàn)檫@些困難,挫折,才讓我們更好地認(rèn)識(shí)了自己,磨礪了自己,感受到了人間的大愛(ài),讓我們慢慢學(xué)會(huì)了成長(zhǎng),讓我們變得更加堅(jiān)強(qiáng).在困境中,不要哭泣,不要抱怨,想想那些關(guān)心、幫助我們的人們,他們想看到的一定是更加堅(jiān)強(qiáng)的我們.
一個(gè)人之所以會(huì)放棄,是因?yàn)樗豢吹搅饲奥返钠D辛,卻忘了自己是走了多久才走到這里的.無(wú)論以后我們遇到多大的困難,不退縮,不放棄！
晉升發(fā)言稿范文第2篇
尊敬的老師們、親愛(ài)的同學(xué)們：
大家好！
"理想很遠(yuǎn)大，要么實(shí)現(xiàn)它，要么回家待著。"我相信這句話大家都聽(tīng)說(shuō)過(guò)不止一次了。人們都說(shuō)希望自己能夠取得進(jìn)步，使自己的人生發(fā)生轉(zhuǎn)變，同學(xué)們也總是被告訴說(shuō)："只要有進(jìn)步，學(xué)習(xí)就不成問(wèn)題。"那么，所謂的"進(jìn)步"是一下子就能取得的嗎？很顯然不是。正所謂"不積跬步，無(wú)以致千里；不積小流，無(wú)以成江海。"學(xué)習(xí)也是如此，只有你在課堂上專心致志地聽(tīng)講，腳踏實(shí)地地完成老師布置的一切任務(wù)，進(jìn)步才會(huì)屬于你。
期中考試剛剛過(guò)去，看到成績(jī)后，我們每個(gè)同學(xué)或多或少都會(huì)有感慨，有體會(huì)。就我而言，這次考試能取得這樣不小的進(jìn)步，我覺(jué)得與平時(shí)的學(xué)習(xí)密切相關(guān)。
一、學(xué)習(xí)多預(yù)習(xí)。顧名思義，就是在老師教之前，自己先學(xué)個(gè)大概。科代表經(jīng)常叫我們預(yù)習(xí)，但很多人不理解什么才是預(yù)習(xí)。以數(shù)學(xué)為例，在老師未講之前，先把重要的知識(shí)點(diǎn)、公式勾畫(huà)出來(lái)，將自己不懂的地方標(biāo)上特殊的記號(hào)，在老師講的時(shí)候，著重聽(tīng)這一方面的問(wèn)題。
二、上課聽(tīng)講時(shí)要學(xué)會(huì)做筆記。筆記每個(gè)人都做過(guò)，但是不是每個(gè)人都會(huì)做呢？以上語(yǔ)文課為例，我們?cè)谡n堂上除了認(rèn)真聽(tīng)老師講外，還要做到"手不停筆".對(duì)于老師講解的重點(diǎn)字、詞、句、段做注音、注釋。老師講課時(shí)通常會(huì)對(duì)重點(diǎn)句進(jìn)行賞析，在這時(shí)要保證認(rèn)真聽(tīng)，思考與自己的答案有什么不同，要學(xué)會(huì)取長(zhǎng)補(bǔ)短，對(duì)老師講述的文章主題、結(jié)構(gòu)特點(diǎn)、寫(xiě)作方法等要做清楚的記錄，不能寫(xiě)得過(guò)于簡(jiǎn)單，不然復(fù)習(xí)時(shí)就不知道自己寫(xiě)的什么，等于做了無(wú)用功。
三、課后及時(shí)復(fù)習(xí)。這一點(diǎn)是老師不厭其煩地講過(guò)的，卻很少有人把它當(dāng)回事，但其實(shí)它是學(xué)習(xí)中最重要的一點(diǎn)。就拿英語(yǔ)來(lái)說(shuō)，當(dāng)天學(xué)習(xí)的英語(yǔ)單詞，當(dāng)天是記住了，可三天后呢？五天后呢？相信大家也不會(huì)過(guò)目不忘。因此，我們可以利用晚自習(xí)、早自習(xí)這些時(shí)間多讀多記。但也不要死記，而要記住它的發(fā)音、相似詞等，從而保證學(xué)得會(huì)，記得牢，用昨上。
以上是我的幾點(diǎn)學(xué)習(xí)方法。方法固然重要，但刻苦鉆研、精益求精的精神更是不可缺少的。常言道："一份耕耘，一份收獲。"只要我們勤奮學(xué)習(xí)，我們就能取得進(jìn)步，實(shí)現(xiàn)目標(biāo)，在追逐夢(mèng)想的舞臺(tái)上一展身手。
同學(xué)們，成功永遠(yuǎn)屬于腳踏實(shí)地、堅(jiān)持不懈、持之以恒、努力拼搏的人。在以后的學(xué)習(xí)中，希望我們能共同學(xué)習(xí)，共同進(jìn)步，共同提高，為學(xué)校的明天共爭(zhēng)榮光！
謝謝大家！
晉升發(fā)言稿范文第3篇
你們好！我是12班的一名學(xué)生，很榮幸得到老師的批準(zhǔn)做這次演講。
首先要接受一下我們班級(jí)，12班由音樂(lè)生，舞蹈生和美術(shù)生三部分組成，是全年級(jí)最大的大家庭，我們班一共74人，雖說(shuō)我們是藝術(shù)班，可我們班的老師一點(diǎn)都不差，基本是快班的老師來(lái)輔導(dǎo)我們學(xué)習(xí)，在此我不得不提我們的班主任老師。
從軍訓(xùn)直到開(kāi)學(xué)以來(lái)，我們進(jìn)行了豐富多彩的活動(dòng)，每一項(xiàng)活動(dòng)都少不了夏老師的身影，為我們記錄生活的點(diǎn)點(diǎn)滴滴。軍訓(xùn)時(shí)，夏老師每天都會(huì)來(lái)看看我們，我們抱怨天氣熱，食物難吃，訓(xùn)練艱苦，卻不知道老師也和我們過(guò)一樣的生活，我們訓(xùn)練時(shí)，老師頂著酷熱為我們拍下值得回味的照片；我們抱怨上晚自習(xí)累，回家還要繼續(xù)寫(xiě)作業(yè)，但夏老師晚上一般也到7點(diǎn)左右才回家；上課期間，老師會(huì)不是刻意從樓上跑下來(lái)看我們上課的紀(jì)律，這些都是一位平凡的老師為我們做的不平凡的事。
記得有次我的作業(yè)本沒(méi)有買(mǎi)拉桿夾，書(shū)都快要散架了，老師專門(mén)為我買(mǎi)了一個(gè)書(shū)皮包上，送到我手中，當(dāng)時(shí)我十分感動(dòng)，可竟然連一聲謝謝都沒(méi)有說(shuō)出口。看著夏老師漸漸遠(yuǎn)去的身影，消失在窗外的黑夜中，我感到心酸，在這里我要對(duì)老師說(shuō)聲：“老師，您辛苦了！”
請(qǐng)家長(zhǎng)們向后看！那里有兩個(gè)大書(shū)柜，是xx同學(xué)的家長(zhǎng)提供給我們放書(shū)的，老師說(shuō)：“我們可以自己帶書(shū)來(lái)放在這兩個(gè)書(shū)柜上，可見(jiàn)相互借閱，一來(lái)可以培養(yǎng)我們的閱讀習(xí)慣，二來(lái)可以為寫(xiě)作積累素材。”
在這里，我也想對(duì)xx的家長(zhǎng)說(shuō)聲：“謝謝您和老師為我們創(chuàng)造了這樣一個(gè)溫馨和睦的教室，營(yíng)造了這么一種溫馨的氛圍，十分感謝！”
接下來(lái)我想談?wù)勛约旱膶W(xué)習(xí)。我們都是學(xué)藝術(shù)的，這一條藝術(shù)的道路上很多坎坷，很多是用金錢(qián)堆積起來(lái)的，相信各位家長(zhǎng)誰(shuí)也不想讓自己的孩子在上了三年高中后沒(méi)有一條好的出路，我雖不才，這次期中考試我才考了278分，距離本科最低線還差了2分，可我一點(diǎn)都不灰心，因?yàn)樯洗挝也?40分，但比起上次我已經(jīng)有了很大的進(jìn)步，這就夠了。請(qǐng)家長(zhǎng)對(duì)比一下兩次考試，不要首先注重成績(jī)，我們不是神仙，不可能一口吃成個(gè)胖子，當(dāng)我們可以一點(diǎn)一點(diǎn)進(jìn)步，遲早有一天我們會(huì)達(dá)到標(biāo)準(zhǔn)線上！
晉升發(fā)言稿范文第4篇
改進(jìn)教法交際能力實(shí)驗(yàn)研究目前的中小學(xué)外語(yǔ)教育教學(xué)存在的主要問(wèn)題是施教者沒(méi)有很好理解和吃透新大綱的要求，受應(yīng)試教育的影響，重知識(shí)傳授，輕能力培養(yǎng)，使學(xué)習(xí)者在長(zhǎng)期枯燥的題海中逐漸失去學(xué)習(xí)外語(yǔ)的興趣，使本來(lái)多姿多彩的語(yǔ)言交際活動(dòng)失去了它應(yīng)有的空間和活力，往往是題海中游刃有余，交際中一籌莫展，這一殘酷的現(xiàn)狀值得我們英語(yǔ)教育工作者思考：如何有效地培養(yǎng)學(xué)生的英語(yǔ)交際能力呢？改進(jìn)教法對(duì)交際能力的培養(yǎng)起到至關(guān)重要的作用。
經(jīng)過(guò)問(wèn)卷和實(shí)際觀察，筆者發(fā)現(xiàn)很多英語(yǔ)教師在講課文或語(yǔ)法時(shí)，全節(jié)課都是教師一個(gè)人唱獨(dú)角戲，進(jìn)行講解、翻譯和分析句子結(jié)構(gòu)，套用教參上現(xiàn)成的例句，根本沒(méi)有任何師生雙邊活動(dòng)，也就談不上英語(yǔ)交際能力的培養(yǎng)了。在實(shí)驗(yàn)中，筆者選取兩個(gè)條件相同的平行班級(jí)，分別作為對(duì)比班和實(shí)驗(yàn)班。筆者在對(duì)比班仍是實(shí)行傳統(tǒng)的教學(xué)法，即講授法，教師講、學(xué)生記、課后背；而在實(shí)驗(yàn)班，筆者則大膽地運(yùn)用交際教學(xué)法，即每個(gè)教學(xué)環(huán)節(jié)都具有效的交際活動(dòng)，教學(xué)過(guò)程也是運(yùn)用英語(yǔ)進(jìn)行交際的過(guò)程。特別是在大多數(shù)人認(rèn)為難以實(shí)現(xiàn)交際能力培養(yǎng)的新知識(shí)點(diǎn)的教學(xué)過(guò)程中，筆者作了大膽的嘗試。筆者在對(duì)比班是按以下步驟教授新知識(shí)點(diǎn)或語(yǔ)言點(diǎn)的：教師指出新知識(shí)點(diǎn)教師作出解釋教師給出例句學(xué)生機(jī)械記憶知識(shí)點(diǎn)和例句。在這一教學(xué)過(guò)程中，學(xué)生沒(méi)有任何活用語(yǔ)言的機(jī)會(huì)，只是被動(dòng)地記憶或理解。而在實(shí)驗(yàn)班，筆者則按如下步驟進(jìn)行新知識(shí)點(diǎn)的教學(xué)：讓學(xué)生自己找出難點(diǎn)和重點(diǎn)和學(xué)生討論教師釋疑實(shí)踐、鞏固（結(jié)合學(xué)生熟悉的話題舉例、操練）學(xué)會(huì)應(yīng)用（要求學(xué)生運(yùn)用語(yǔ)言點(diǎn)會(huì)話、造句等），在實(shí)驗(yàn)班的整個(gè)教學(xué)過(guò)程中，每一步驟學(xué)生都有運(yùn)用英語(yǔ)進(jìn)行活動(dòng)的機(jī)會(huì)，大大地激發(fā)了他們學(xué)習(xí)英語(yǔ)的熱情，課堂氣氛活躍，學(xué)生學(xué)得輕松，說(shuō)得愉快，教學(xué)效果較好。例如，對(duì)高中最重要的，也是最難教和最難學(xué)的語(yǔ)言點(diǎn)——定語(yǔ)從句的教學(xué)，筆者在對(duì)比班和實(shí)驗(yàn)班嘗試運(yùn)用了兩種完全不同的教法。在對(duì)比班，筆者對(duì)定語(yǔ)從句的特證和用法作了系統(tǒng)的介紹：定語(yǔ)從句是由關(guān)系代詞或關(guān)系副詞引導(dǎo)的形容詞從句，修飾句中的名詞；引導(dǎo)定語(yǔ)從句的關(guān)系代詞有“who”“whom”“whose”“which”“that”，關(guān)系副詞有“when”“where”“why”，定語(yǔ)從句有限定性和非限定性兩種。每次都舉了例句，還講解了主句和從句的時(shí)態(tài)關(guān)系，十分全面。黑板抄了又擦，擦了又抄，整整用了兩節(jié)課。筆者自感有關(guān)定語(yǔ)從句該講的內(nèi)容已全講完了。學(xué)生全神貫注聽(tīng)了二節(jié)課，感到頭昏腦脹，當(dāng)場(chǎng)學(xué)生反應(yīng)不佳，后來(lái)的作業(yè)檢查更令人失望。而在實(shí)驗(yàn)班則用了完全不同的教學(xué)方法，現(xiàn)摘取部分教學(xué)過(guò)程介紹如下：
第一步：引入。
T：（教師手指窗外）That man is a thief.（板書(shū)）
Ss：（學(xué)生感到驚訝、齊望窗外）Who？ which man？ A thief？
T：The man who is smoking in front of the shop. Can you see？
Ss：（學(xué)生根據(jù)提示尋找，自語(yǔ)）The man who is smoking.
T： Can you see now？
Ss： Yes， I can.
T：Which man？
Ss：The man who is smoking in front of the shop.
T：Right.
第二步：講解。
把學(xué)生所講的最后一句話“The man who is smoking in front of the shop”補(bǔ)充完整，即為“The man（who is smoking in front of the shop）is a thief”，然后就定語(yǔ)從句作簡(jiǎn)單介紹（略）。
第三步：初步操練。
操練的步驟分：要求學(xué)生重復(fù)原句，檢查5～7人；要求學(xué)生依據(jù)此句型認(rèn)指窗外一個(gè)人，必須用定語(yǔ)從句；先在小組中試說(shuō)，教師巡回指導(dǎo)；全班試說(shuō)，說(shuō)得好的，全班重復(fù)。
如：The man who is standing there is our English teacher.
The boy who is running is my friend.
第四步：擴(kuò)散。
T：Do you know why I say the man is a thief？
Ss：（思考）
T：Because the man who is standing in front of the shop stole my bag yesterday.
然后讓學(xué)生聽(tīng)寫(xiě)此句，互相對(duì)照，并讓2～3人讀出此句。全程只用了近20分鐘，又回頭結(jié)合課文進(jìn)一步練習(xí)。在實(shí)驗(yàn)班的教學(xué)過(guò)程中，師生雙向交流，有情有景，學(xué)以致用，從而在學(xué)習(xí)枯燥語(yǔ)法知識(shí)的同時(shí)提高了學(xué)生運(yùn)用英語(yǔ)的能力。
經(jīng)過(guò)近兩年的實(shí)驗(yàn)，筆者對(duì)實(shí)驗(yàn)班和對(duì)比班作了比較：分別在實(shí)驗(yàn)前期、實(shí)驗(yàn)中期及結(jié)題階段隨時(shí)抽取2個(gè)實(shí)驗(yàn)班級(jí)（共110名學(xué)生）及相應(yīng)的2個(gè)對(duì)比班級(jí)（共110名學(xué)生）就相關(guān)細(xì)化的項(xiàng)目進(jìn)行了客觀的測(cè)評(píng)及對(duì)比，分析發(fā)現(xiàn)：隨著實(shí)驗(yàn)時(shí)間的推進(jìn)，實(shí)驗(yàn)班的學(xué)生比相應(yīng)的對(duì)比班級(jí)有了明顯進(jìn)步：
實(shí)驗(yàn)班的學(xué)習(xí)興趣大大增加。有了英語(yǔ)學(xué)習(xí)的興趣，他們運(yùn)用英語(yǔ)的欲望增強(qiáng)了，他們?cè)谙硎苡⒄Z(yǔ)中提高了英語(yǔ)的運(yùn)用能力。
實(shí)驗(yàn)班的學(xué)生的精神面貌變了。在課堂上，他們大膽地表達(dá)自己的觀點(diǎn)，對(duì)老師的話語(yǔ)作出反應(yīng)，他們從心里上真正感到他們是學(xué)習(xí)的主體，他們自信、熱情、活躍以及表達(dá)的欲望就是最好的明證。
實(shí)驗(yàn)班學(xué)生的聽(tīng)、說(shuō)、讀、寫(xiě)能力明顯提高了。他們聽(tīng)的能力提高了，說(shuō)的欲望增強(qiáng)了，運(yùn)用英語(yǔ)進(jìn)行交際的目的達(dá)到了。
晉升發(fā)言稿范文第5篇
金色鏈霉菌(streptomycesaureofaciens)是金霉素的產(chǎn)生菌,是杜加爾(Duggar)于1948年篩選得到的,其發(fā)酵單位只有165U/mL[2].19世紀(jì)50年代后,我國(guó)實(shí)現(xiàn)了金霉素的工業(yè)生產(chǎn)。高能電子流能誘發(fā)DNA點(diǎn)突變和染色體畸變,得到了成功應(yīng)用[3]。本文通過(guò)高能電子流輻射處理金霉素工業(yè)產(chǎn)生菌,選育出高產(chǎn)、遺傳穩(wěn)定的菌株,并對(duì)發(fā)酵工藝進(jìn)行了研究,以期摸索規(guī)律指導(dǎo)工業(yè)生產(chǎn)。
1、材料和方法
1.1菌株 出發(fā)菌株金色鏈霉菌(streptomycesaureofaciens)工業(yè)生產(chǎn)菌株JH-02由金河生物科技股份有限公司保存提供。
1.2 培養(yǎng)基及培養(yǎng)條件
1.2.1 平板培養(yǎng)基(%)
小麥粉 2.0,硫酸鎂0.005,磷酸二氫鉀0.01,磷酸氫二銨0.015,瓊脂2.0。120℃實(shí)消30分鐘。在溫度32℃±0.5℃、相對(duì)濕度40-60%條件下培養(yǎng)4-5天。
1.2.2斜面培養(yǎng)基(%)
麩皮 3.2,硫酸鎂0.005,磷酸二氫鉀0.01,磷酸氫二銨0.015,瓊脂2.0,PH 7.4―7.6。120℃實(shí)消30分鐘。在溫度32℃±0.5℃、相對(duì)濕度40-60%條件下培養(yǎng)4天。
1.2.3種子培養(yǎng)基(%)
玉米淀粉4.0,黃豆粉2.0,蛋白粉0.5,酵母粉0.5,碳酸鈣0.4,硫酸銨0.3,氯化鈉0.2,硫酸鎂0.025,磷酸二氫鉀0.025,培養(yǎng)基裝量25ml/250ml三角瓶,120℃實(shí)消30分鐘。在溫度30℃±0.5℃下培養(yǎng)22―26小時(shí)。
1.2.4發(fā)酵培養(yǎng)基(%)
玉米淀粉10,花生粉1.5,黃豆粉2.5,淀粉酶0.004,氯化鈉0.25,硫酸銨0.5,碳酸鈣0.7,蛋白粉1.4,酵母粉0.2,硫酸鎂0.025,豆油1.25ml/25ml,培養(yǎng)基裝量25ml/250ml三角瓶,120℃實(shí)消30分鐘。在溫度30℃±0.5℃條件下培養(yǎng)5天。
1.3高能電子流誘變
高能電子流發(fā)射器為BF-5電子直線加速器(E=5MeV,I=100uA),由北京師范大學(xué)低能核物理研究所提供。培養(yǎng)4天的新鮮斜面用15ml0.2%的葡萄糖液洗脫成熟孢子,倒入玻璃大試管中32℃振搖3小時(shí)。振搖結(jié)束后加100 ml無(wú)菌鹽水制成單孢子懸浮液(>108個(gè)/ml),分裝5ml于玻璃管中。低溫狀態(tài)下送到北京師范大學(xué)低能核物理所用高能電子流進(jìn)行誘變。
每劑量組9瓶:
A組:束流2×10-7A
吸收劑量10GY/S從5秒-90秒共9個(gè)照射時(shí)間梯度
B組:束流3×10-7A
吸收劑量15GY/S從5秒-90秒共9個(gè)照射時(shí)間梯度
輻射后立即稀釋涂平板。
1.4 50L發(fā)酵罐放大實(shí)驗(yàn)
將復(fù)篩得到的高產(chǎn)菌株與出發(fā)菌株JH-02分別接種于斜面培養(yǎng)基,34℃,培養(yǎng)4～5天。從成熟的斜面上刮取孢子,接種到5L種子罐培養(yǎng)基中,32℃,150r/min,培養(yǎng)24小時(shí)。以10%的接種量將種子培養(yǎng)液轉(zhuǎn)接于50L發(fā)酵罐中,32℃,280r/min,培養(yǎng)120小時(shí)。
1.5發(fā)酵效價(jià)測(cè)定
化學(xué)測(cè)定法。利用金霉素在酸性溶液中經(jīng)加熱后能脫去一分子水,生成黃色的脫水金霉素,其色度與含量成正比。此性質(zhì)符合郎伯-比耳定律,故利用比色法來(lái)測(cè)定其效價(jià)。
發(fā)酵液經(jīng)草酸酸化過(guò)濾后,吸1ml濾液于9ml蒸餾水中,分別吸取1ml稀釋濾液于2只50ml裝有5ml 2mol鹽酸的容量瓶中,一只用作CK,另一只于沸水煮沸5分鐘,冷卻后加水定容至刻度,搖勻后于721―B型分光光度計(jì)、波長(zhǎng)440nm、光程1cm測(cè)定。
1.6 菌體濃度的測(cè)定
采用離心法測(cè)定。先測(cè)離心管的重量W0,然后取10ml發(fā)酵液加入離心管,測(cè)定總質(zhì)量W1,離心(2000r/min×3min),棄上清,測(cè)定沉淀物及管總質(zhì)量W2。根據(jù)公式計(jì)算菌體濃度。
菌體濃度=
1.7 總糖含量的測(cè)定:
見(jiàn)文獻(xiàn)[4]。
1.8 菌體粘度的測(cè)定:
玻璃毛細(xì)管粘度計(jì)測(cè)定[5]。
2、結(jié)果分析
2.1高能電子流對(duì)菌株孢子的致死效應(yīng)
將處理好的孢子液,稀釋成一定的梯度濃度,涂布在分離平板上,在溫度32℃±0.5℃、相對(duì)濕度40-60%條件下培養(yǎng)2-3天,計(jì)算誘變死亡率。由表1可以看出,JH-02對(duì)于高能電子流輻射表現(xiàn)出高度的敏感性,致死率與輻射劑量、輻射時(shí)間成正比。
2.2搖瓶篩選結(jié)果
出發(fā)菌株JH-02經(jīng)高能電子流處理后,初篩得到35株新菌株,進(jìn)一步復(fù)篩得到1株金霉素產(chǎn)量明顯提高的菌株:D-23。將D-23菌株連續(xù)傳5代(表1)。菌株D-23產(chǎn)素能力平均為21145u/ml,與JH-02發(fā)酵單位(u/ml)相比提高了13.1%。
2.3放大實(shí)驗(yàn)中新菌株與原始菌株生理生化特性的比較
將高產(chǎn)菌株D-23與出發(fā)菌株JH-02分別在50L發(fā)酵罐中進(jìn)行放大實(shí)驗(yàn),對(duì)發(fā)酵過(guò)程中兩菌株的物理、生物、化學(xué)等參數(shù)進(jìn)行比較,結(jié)果如下。
2.3.1 生長(zhǎng)特性的比較:
:JH-02菌體濃度,■:D-23菌體濃度,
:JH-02發(fā)酵液粘度, :D-23發(fā)酵液粘度
圖1JH-02與D-23菌體濃度及發(fā)酵液粘度的比較
Fig.1 Constract of the Mycelium Concentration and the Viscidity between JH-02 and D-23
在發(fā)酵過(guò)程中,D-23的菌體濃度比JH-02高5～10%。發(fā)酵中后期,JH02的粘度迅速降至2s,而D-23仍可保持較高粘度,表明其菌體仍保持一定活力(見(jiàn)圖1)。
:JH-02 ■:D-23
圖2JH-02與D-23溶解氧的比較
Fig.2 Constract of DO between JH-02 and D-23
在發(fā)酵過(guò)程中,特別是在產(chǎn)素集中的中期發(fā)酵過(guò)程中,D-23的DO明顯低于JH-02,表明其需氧增強(qiáng),菌體代謝的活力明顯高于JH-02。
2.3.2 發(fā)酵過(guò)程曲線的比較:
在發(fā)酵前期,D-23與出發(fā)菌株的糖代謝速率基本一致,產(chǎn)物合成速率也基本一致;發(fā)酵中期,與出發(fā)菌株相比,D-23菌株活力較強(qiáng),底物消耗速率略高于出發(fā)菌株,產(chǎn)物合成速率也明顯高于出發(fā)菌株(見(jiàn)圖3)。發(fā)酵結(jié)束時(shí),出發(fā)菌株JH-02的金霉素產(chǎn)量為18905u/ml,D-23為21060u/ml,比出發(fā)菌株高11.4%。
:JH-02糖代謝率,■:D-23糖代謝率,
:JH-02產(chǎn)物合成速率, :D-23產(chǎn)物合成速率
圖3 JH-02與D-23發(fā)酵過(guò)程曲線的比較
Fig.4 Constract of the Fermentation Curve between JH-02and D-23
通過(guò)以上實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證,結(jié)果標(biāo)明高能離子流處理的突變菌株D-23的穩(wěn)定性和產(chǎn)素能力都明顯優(yōu)于出發(fā)菌株JH-02。
3、分析討論
近年來(lái),出現(xiàn)了一些新型的誘變方法用于微生物的誘變育種,如微波、紅外射線、激光、高能電子流、離子注入等,誘變生物學(xué)效應(yīng)比較明顯。由于金色鏈霉菌代謝復(fù)雜,DNA鏈結(jié)合緊密,所以用常規(guī)的處理方法及誘變劑效果不太明顯。高能電子流是具有相當(dāng)能量的粒子流,帶有負(fù)電荷,它射入生物體時(shí),可以直接使遺傳物質(zhì)電離,引起DNA互補(bǔ)鏈的氫鍵破裂,也能引起DNA雙鏈和單鏈的斷裂,在微生物自身修復(fù)機(jī)制的作用下,會(huì)引起微生物DNA點(diǎn)突變和染色體畸變[6]。由于金霉素產(chǎn)生菌株對(duì)高能電子流比較敏感,致死率與劑量和照射時(shí)間成正比,故而為了得到大量的誘變體,用于照射的孢子液應(yīng)該有較高的濃度,同時(shí)在比較合適的劑量下,照射時(shí)間在30-60秒得到的誘變體數(shù)量較為合適。實(shí)驗(yàn)證明高能電子流照射金霉素生產(chǎn)菌株是一種行之有效的誘變方法。
